目前PCR實驗室建設要求至少應該分為三個區域,即試劑準備區、核酸制備區和PCR擴增區。如果要對擴增產物進行開放性鑒定,如雜交、電泳等操作,原則上需要增加第四個區。實驗室分區的主要目的是避免純化核酸和擴增產物逆向污染前一個區域。但多年的經驗表明,無論是三區還是四區的設置,似乎都沒有完全杜絕實驗室污染的發生。那么PCR實驗室究競應如何建設才能有利于污染的預防和有效清除?
其實污染就是PCR擴增管中摻入了原來樣本不存在的擴增核酸,那么這個不受歡迎的核酸是怎么來到PCR擴增管里的?如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環節,核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實驗室建設應該重點考慮的環節。
實驗室的建設首先要有通風設置,通風是PCR實驗室建設應該考慮的基本條件,如果采用封閉彩鋼板建設的實驗室,應進行壓差設置，即自試劑準備室、核酸制備室到擴增室依次呈負壓,但清潔新風應從室外引進,新風過濾網應定期更換,否則便會成為污染的來源。其次是實驗室墻面和地面具有防水功能,也就是墻面和地面可以水洗。每個房間設置地漏,方便“實驗室的清潔”， 當實驗室污染發生時,即可使用“水洗實驗室”的方法有效清除污染,清除過程使用的是0.29%有效氨溶液,它不但有效斷裂核酸片段,而且還具有淬滅熒光基團,有利于PCR實驗室熒光本底的去除。但過量使用反而會影響試劑擴增效率。消毒液清洗后應該使用自來水或清潔水進行再次清洗,特別是設備表面。實驗室空氣中的污染清除,可以用有效氨溶液進行噴霧。
總之，PCR實驗室過度分區和分割,不但浪費空間,影響人員操作,常常不利于污染物的擴散和清除。相信在不久的將來,隨著試劑盒技術的發展,一個房間可實現PCR的試劑準備、核酸純化和PCR打增的所有功能，而污染的預防和清除也會顯得十分簡單。
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